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公司最新研发替抗亚博体育官方网下载—复合绿原酸
作者:管理员    发布于:2019-03-26 15:40:47    文字:【】【】【

公司最新研发替抗亚博体育官方网下载—复合绿原酸

仔猪从断奶到70日龄的阶段为保育阶段,此阶段的仔猪存在着诸如消化机能尚不成熟、消化酶活性低、胃排空时间短、免疫系统存在缺陷及体温调节能力差等生理特点[1]。此外,仔猪还受到突然变化的饲粮结构的影响,由易消化吸收的液体母乳转变为固体亚博下载链接,饮食结构发生改变。因此,断奶会导致仔猪肠道发生组织形态学和生理学上的变化,如肠绒毛萎缩、隐窝增生、肠粘膜通透性增强等,从而会引起仔猪消化和吸收功能下降,免疫机能降低,最终发生腹泻和生长性能下降等[2]。大量研究表明,饲粮中添加抗生素、高铜、高锌等可促进仔猪生长,缓解仔猪断奶应激[3-4]。不过,虽然抗生素等添加物的大规模使用给养殖业带来了巨大的效益,但其产生的污染环境、残留及耐药性等弊端日益凸显。因此,在饲粮中取消抗生素及限制高铜、高锌使用的呼声日益高涨,新型绿色亚博下载链接添加物的研发也同时引起了人们的广泛关注。

绿原酸(chlorogenic acidCA)系一种缩酚酸,源于多种植物,是植物在有氧呼吸过程中通过莽草酸循环途径,由咖啡酸和奎尼酸经过缩合反应而生成的一种次生代谢产物[5]。根据日前的研究报道,CA具有极其广泛的生物学活性,包括抗菌、抗炎、抗病毒及抗氧化等[6-7]。刘英等[8]研究发现,在三元杂交断奶仔猪饲粮中添加CA后,仔猪抗氧化能力得到增强。刘则学等[9]报道,在规模化猪场饲养的断奶仔猪饲粮中添加CA后,料重比(F/G)显著降低,腹泻频率明显降低,每千克增重成本降低。这表明,在饲粮中添加CA有助于断奶仔猪的生长,提高经济效益。但是,目前关于添加CA在断奶仔猪的应用还较少,且效果更是不完全明确。因此,本试验旨在研究饲粮添加不同剂量CA对断奶仔猪生长性能、血清免疫球蛋白含量以及肠道黏膜形态与消化吸收能力的影响,评估其能否促进断奶仔猪肠道健康,增强免疫功能,改善生长性能,为CA在猪养殖生产中的应用提供科学依据。

材料与方法

1.1  试验材料

试验动物为健康杜×长×大三元杂交阉割公猪,购于四川铁骑力士实业有限公司;试验所用CA为合成品(纯度99.5%),由四川君正生物亚博下载链接有限公司提供。

1.2  试验设计及饲粮

试验在四川农业大学动物营养研究所基地进行。选择平均体重为(9.45±0.20kg的仔猪24头,依据体重一致原则随机分为4组,即对照组(饲喂基础饲粮)、CA250组(饲喂基础日粮+250mg/kg CA)、CA500组(饲喂基础日粮+500mg/kg CA)和CA1000组(饲喂基础日粮+1000mg/kg CA),每组6个重复,每个重复1头猪,单笼饲养。试验期为14d。每天分别于0800120016002000饲喂,共4次,自由采食,充足饮水。仔猪饲粮参照NRC2012)猪营养需要进行配制,基础饲粮组成及营养水平见表1

1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

Table 1  Composition and nutrient levels of the basal dietair-dry basis %

项目Items

含量Content

原料Ingredients

 

普通玉米Corn

26.50

膨化玉米Extruded corn

25.45

大豆粕Soybean meal

11.50

膨化大豆Extruded soybean

12.50

大豆浓缩蛋白Soybean protein concentrate

5.00

鱼粉Fish meal

4.00

乳清粉Whey powder

7.00

豆油Soybean oil

1.50

葡萄糖Glucose

4.00

食盐NaCl

0.30

石粉Limestone

0.65

磷酸氢钙CaHPO4

0.60

氯化胆碱Chloride choline

0.10

L-赖氨酸盐酸盐L-Lys HCl

0.30

DL-蛋氨酸DL-Met

0.08

苏氨酸Thr

0.06

色氨酸Trp

0.02

维生素预混料Vitamin premix1)

0.04

矿物元素预混料Mineral premix1)

0.40

合计Total

100.00

营养水平Nutrient leverl2)

 

消化能DE/MJ/kg

14.86

粗蛋白质CP

19.80

Ca

0.92

总磷TP

0.55

有效磷AP

0.37

总赖氨酸Total Lys

1.41

总蛋氨酸Total Met

0.47

总苏氨酸Total Thr

0.79

总蛋氨酸+半胱氨酸Total Met+Cys

0.75

总色氨酸Total Trp

0.22

1预混合为每千克饲粮提供The premix provided the following per kg of the dietVA 6000 IUVD3 400 IUVE 10 IUVK3 2.0 mgVB1 0.80 mgVB2 6.4 mgVB6 2.4 mgVB12 12 ug 叶酸folic acid 0.20 mg,烟酸nicotinic acid 14 mgD-泛酸D-pantothenic acid 10 mgFe as ferrous sulfate120mgCuas copper sulfate6 mgMnas manganese sulfate40mgZnas zinc sulfate100mgIas potassium sulfate0.30mgSeas sodium sulfate0.30mg

2消化能为计算值,其余为实测值。DE was a calculated valuewhile the others were measured values.

1.3  测定指标及方法

1.3.1  生长性能

试验正式开始第1天早晨,仔猪空腹称重,试验期每日记录每头猪的采食情况,包括每日喂料量、剩余料量及浪费料量,第14天清晨再次对仔猪空腹称重。计算仔猪的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)及F/G

1.3.2  血清免疫球蛋白含量

于试验第14天清晨空腹采集前腔静脉血10mL,静置30min后,以3500r/min离心10min,取上层血清保存于-20℃,用于测定血清免疫球蛋白AIgA)、免疫球蛋白GIgG)及免疫球蛋白MIgM)含量。测定采用北京诚林生物科技有限公司的酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒,严格按照试剂盒说明书操作。

1.3.3  肠道黏膜形态

试验结束屠宰后,迅速分别取十二指肠、空肠及回肠中段各1cm左右组织,用4%多聚甲醛固定。常规制作石蜡包埋组织块,制作组织切片,厚度为5μm,用苏木精-伊红染色法染色并封片。于光学显微镜下观察拍照,随机选取10个视野测定绒毛高度和绒毛宽度以及隐窝深度,并计算绒毛高度/隐窝深度(V/C)值。

1.3.4  肠黏膜二糖酶活性

屠宰后迅速分别取十二指肠、空肠及回肠肠段,剖开并弃去肠内容物,用生理盐水冲洗,滤纸吸干残余水分。用玻片刮取黏膜组织,分装于冻存管并暂存于-80℃。分别称取适量黏膜组织至匀浆器中,按黏膜重量以1:9比例加入冷生理盐水,在冰浴条件下制成黏膜组织匀浆液。将匀浆液转移至离心管,4℃、3500r/min离心15min,取上清液分装于0.5mL离心管中,-20℃保存,用于蔗糖酶及麦芽糖酶这2种二糖酶活性的测定。测定采用南京建成生物工程研究所试剂盒,严格按说明书操作。

1.3.5  肠道葡萄糖转运蛋白基因表达

采用实时荧光定量PCR法检测肠道钠-葡萄糖协同转运蛋白1SGLT1)、葡萄糖转运蛋白2GLUT2)这2种葡萄糖转运蛋白的基因表达,所用试剂盒购自天根生化科技有限公司。主要方法如下:取十二指肠、空肠及回肠黏膜组织,用Trizol试剂提取黏膜总RNA,核酸检测仪测定吸光度(OD260、(OD280及(OD320值,并计算样品RNA浓度与纯度。cDNA合成按照试剂盒说明书进行,2种目的基因与内参基因β-肌动蛋白(β-actin)的引物序列详见表2SYBR Green实时荧光定量PCR体系按试剂盒说明书操作。PCR反应条件为:95℃,1min95℃,5s;按表2中的退火温度,35s;共45个循环。用2-△△Ct法计算2种目的基因的相对表达量。

2 实时荧光定量PCR引物序列

Table2  Primer sequences for quantitative real-time PCR

基因                                              Genes

引物序列                                                              Primer sequences5’—3’)

退火温度  Tm/

产物大小       Product size/bp

-葡萄糖协同转运蛋白1 SGLT1

FTGTATTTGAGGCCAGTGTCA                 RGGGCACCACAACTCTTAAA

55.7

198

葡萄糖转运蛋白2                     GLUT2

FTGGAATCAGCCAACCTGTTT                 RACAAGTCCCACCACATGA

55.7

165

β-肌动蛋白                             β-actin

FTCTGGCACCACACCTTCT                       RTGATCTGGGTCATCTTCTCAC

55.7

114

1.4  数据统计分析

试验数据采用SPSS19.0统计软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA),用Duncan氏法进行多重比较,以P0.05为差异显著,结果以平均值±标准差表示。

结果

2.1  CA对仔猪生长性能的影响

由表3可知,各组间ADGADFI均无显著差异(P0.05),但CA1000ADGADFI较对照组略有上升;CA250组合CA500F/G与对照组无显著差异(P0.05),但CA1000F/G显著低于对照组(P0.05)。

3  CA对仔猪生长性能的影响

Table3  Effects of CA on growth performance of piglets

项目

Items

组别Groups

对照Contorl

CA250

CA500

CA1000

平均日增重ADG/kg

0.41±0.01

0.44±0.06

0.45±0.01

0.47±0.01

平均日采食量ADFI/kg

0.67±0.07

0.69±0.08

0.68±0.02

0.70±0.04

料重比F/G

1.58±0.04a

1.53±0.03ab

1.53±0.01ab

1.44±0.02b

同行数据肩标无字母或相同小写字母表示差异不显著(P0.05),不同小写字母表示差异显著(P0.05),不同大写字母表示差异极显著(P0.01.小表同。

In the same rowvalues with no letter or the same letter superscripts mean no significant differenceP0.05),while with different small letter superscripts mean significant differenceP0.05),and with different capital letter superscripts mean extremely significant differenceP0.01.The same as below.

2.2  CA对仔猪血清免疫球蛋白含量的影响

由表4可知,各组间血清IgA含量均无显著差异(P0.05),但CA1000组较对照组略有升高;CA250组和CA500组血清IgG含量与对照组相比无显著差异(P0.05),但CA1000组血清IgG含量显著高于对照组和CA250组(P0.05);各组间血清IgM含量均无显著差异(P0.05)。

4  CA对仔猪血清免疫球蛋白含量的影响

Table4  Effects of CA on serum immunoglobulin content of piglets

项目

Items

组别Groups

对照Contorl

CA250

CA500

CA1000

免疫球蛋白A IgA

0.81±0.07

0.81±0.06

0.83±0.04

0.86±0.06

免疫球蛋白G IgG

2.46±0.26a

2.41±0.20a

2.49±0.40ab

2.75±0.53b

免疫球蛋白M IgM

0.21±0.04

0.22±0.04

0.17±0.03

0.18±0.03

2.3  CA 对仔猪肠道黏膜形态的影响

由表5可知,在十二指肠,试验组绒毛高度均较对照组增加,其中CA1000组显著高于对照组(P0.05);试验组绒毛宽度较对照组有增加趋势(P0.05);试验组隐窝深度显著低于对照组(P0.05);试验组V/C值均较对照组增加,其中CA500组和CA1000组显著高于对照组(P0.05),且2组间差异显著(P0.05)。在空肠,CA1000组空肠绒毛高度和绒毛宽度均较对照组显著增加(P0.05);各组间空肠隐窝深度及V/C值均无显著差异(P0.05)。在回肠,各组间绒毛高度、绒毛宽度、隐窝深度及V/C值均无显著差异(P0.05)。

5  CA对仔猪肠道黏膜形态的影响

Table5  Effects of CA on intestinal mucosa morohology of piglets

项目

Items

组别Groups

对照Contorl

CA250

CA500

CA1000

十二指肠Duodenum

 

 

 

 

绒毛高度Villus height/um

308.46±14.87a

317.56±12.67a

337.93±21.65a

433.54±12.99b

绒毛宽度Villus width/um

112.09±4.47

111.89±5.83

122.51±4.22

125.32±5.16

隐窝深度Crypt depth/um

217.33±4.24a

191.37±7.23b

182.89±6.80b

174.76±6.04b

绒毛高度/隐窝深度V/C

1.42±0.07a

1.66±0.04ab

1.84±0.06b

2.49±0.14c

空肠Jejunum

 

 

 

 

绒毛高度Villus height/um

212.47±13.44a

219.62±13.82ab

229.65±7.10ab

246.46±2.37b

绒毛宽度Villus width/um

109.17±3.41a

107.63±1.14a

112.26±3.36ab

117.82±0.85b

隐窝深度Crypt depth/um

177.11±6.21

185.04±5.74